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Esta prueba sirve para determinar
la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de
la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa
que activa la oxidación del citocromo que es reducido
por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido
de hidrógeno según la especie bacteriana.
El oxígeno actúa por tanto como aceptor
final de electrones en la cadena transportadora de electrones.
Por lo general, el sistema citocromooxidasa sólo
se encuentra en los organismos aerobios, algunos anaerobios
facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo
(Vibrio fetus), pero los anaerobios estrictos carecen
de actividad oxidasa. Asímismo, la presencia de
oxidasa va ligada a la producción de catalasa,
ya que ésta degrada el peróxido de hidrógeno
(ver prueba de la catalasa)
que se produce como consecuencia de la reducción
del oxígeno y cuya acumulación es tóxica.
La prueba de la oxidasa se
usa sobre todo para
- Identificar todas las especies de Neisseria
(+)
- Diferenciar Pseudomonas de los
miembros oxidasa negativos de las enterobacterias.
El reactivo de la oxidasa
más recomendado es la solución acuosa al
1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina
(reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más
sensible que el correspondiente compuesto dimetilo (reactivo
de Gordon y McLeod), pero es más caro. Este reactivo
tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda
que vira gradualmente a púrpura-negruzco intenso.
Realización de la
prueba:
- Método en placa directa
- Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas
colonias. No inundar toda la placa y no invertirla.
- Observar los cambios de color. Con el reactivo de
Kovacs la reacción se produce en unos 10-15 segundos,
mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de
los 10-30 minutos.
- Método indirecto sobre papel
- Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente
en una placa de Petri.
- Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro
del papel.
- Extender con el asa de siembra una colonia sobre el
papel impregnado.
- La reacción de color positiva se produce a
los 5-10 segundos.
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